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  "abstract": "Introdução: A manutenção da homeostase celular depende da integração entre programas de transcrição gênica, progressão do ciclo celular, adaptação ao estresse e morte celular programada. A desregulação desses processos constitui uma característica central das leucemias agudas e representa uma oportunidade para a identificação de novas vulnerabilidades terapêuticas. A cromomicina A2, membro da família dos ácidos aureólicos, liga-se a regiões ricas em GC do DNA e interfere na regulação transcricional, porém seus mecanismos de ação em neoplasias hematológicas permanecem pouco compreendidos. Objetivos: Identificar determinantes genéticos responsáveis pela resposta celular à cromomicina A2 em leucemias utilizando rastreamento genômico por CRISPR/Cas9. Material e métodos: Células NALM6 expressando Cas9 induzível foram transduzidas com uma biblioteca CRISPR/Cas9 contendo 278.754 sgRNAs direcionados a todo genoma (RefSeq). Após indução das deleções gênicas por doxiciclina, as células foram cultivadas na ausência ou presença de cromomicina A2 (0,7 nM). O crescimento celular foi monitorado periodicamente, seguido de extração de DNA genômico, amplificação das sequências de sgRNAs, sequenciamento de nova geração e análise dos resultados pelo algoritmo CRANKS. Os resultados foram integrados aos estudos funcionais previamente realizados, incluindo viabilidade celular, apoptose, clonogenicidade, microscopia eletrônica, expressão gênica e immunoblotting. Resultados: A cromomicina A2 apresentou potente atividade antileucêmica em modelos celulares, induzindo remodelamento autofágico precoce, atraso na progressão da fase S, apoptose e acúmulo de γH2AX. O rastreamento por CRISPR identificou genes cuja perda aumentou significativamente a sensibilidade à cromomicina A2, destacando componentes das vias de reparo de DNA por excisão de nucleotídeos (ERCC1, ERCC4, ERCC5 e XPA), resposta ao estresse replicativo (SLFN11), apoptose mitocondrial (APAF1, BAK1 e CASP9), proteostase (FAF2, MBTPS2, UBQLN1, PLAA e RTCB) e metabolismo celular (GFPT1, GMPPB, KDSR, SLC4A7 e AHCYL1). Esses resultados indicam que múltiplos processos celulares contribuem para a resposta citotóxica induzida pela cromomicina A2. Discussão: A identificação de genes envolvidos no reparo de DNA, apoptose, proteostase e metabolismo demonstra que a atividade antitumoral da cromomicina A2 depende da integração de diferentes vias responsáveis pela manutenção da homeostase celular. Esses achados corroboram os resultados funcionais obtidos anteriormente e fornecem novas evidências sobre os mecanismos moleculares associados à resposta ao tratamento. Conclusão: O rastreamento funcional por CRISPR/Cas9 revelou vulnerabilidades genéticas associadas à resposta à cromomicina A2 em leucemias agudas, destacando vias de reparo de DNA, estresse celular e apoptose como determinantes da sensibilidade ao composto. Esses resultados ampliam a compreensão do mecanismo de ação da cromomicina A2 e identificam potenciais biomarcadores e alvos terapêuticos para futuras estratégias em neoplasias hematológicas.",
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    "Departamento de Clínica Médica, Divisão de Hematologia, Faculdade de Medicina, Universidade de São Paulo (USP), São Paulo, SP, Brasil",
    "Departamento de Farmacologia, Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo (USP), São Paulo, SP, Brasil",
    "ChemoGenix CRISPR Screening Platform, Institute for Research in Immunology and Cancer, Université de Montréal, Canadá"
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