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  "abstract": "A eritropoiese é o processo de formação dos eritrócitos a partir de precursores mieloides, regulado por fatores específicos e por condições biofísicas. Para reproduzi-la in vitro, é necessário simular essas condições de forma semelhante ao ambiente in vivo. Embora a diferenciação de células mononucleares de sangue periférico (CMSP) constitua uma alternativa para a obtenção de células eritroides, essa abordagem apresenta limitações, como baixa taxa de enucleação, reduzido rendimento celular e disponibilidade restrita de amostras. Nesse contexto, as células-tronco pluripotentes induzidas (iPSCs) destacam-se por sua elevada capacidade de autorrenovação, expansão e diferenciação, representando uma plataforma promissora para estudos de eritropoiese, modelagem de doenças e desenvolvimento de novas abordagens terapêuticas. Este trabalho teve como objetivo padronizar e caracterizar um protocolo de diferenciação in vitro de iPSCs em células da linhagem eritroide, adaptado de protocolo previamente descrito na literatura, visando à obtenção de eritrócitos enucleados para aplicações experimentais. Foi utilizada uma linhagem de iPSCs derivada de doador saudável, submetida a um protocolo de diferenciação com duração de 28 a 35 dias, dividido em quatro etapas. Na fase 1, foi induzido o comprometimento com a linhagem hematopoiética utilizando b-FGF, VEGF, BMP4 e ITS em meio StemSpan, associado ao plaqueamento do tipo single-cell. Na fase 2, a diferenciação foi direcionada para a linhagem eritropoiética utilizando eritropoietina, h-SCF, IGF-2, IL-3, IL-6 e ITS em meio IMDM. Na fase 3, empregaram-se eritropoietina, h-SCF e dexametasona para promover o enriquecimento das culturas com eritroblastos e, na fase 4, utilizaram-se eritropoietina, heparina e plasma humano visando à maturação celular. Os meios de cultura foram renovados a cada três dias e a progressão entre as etapas ocorreu em intervalos aproximados de sete dias, sem necessidade de replaqueamento celular. O acompanhamento da diferenciação foi realizado por citometria de fluxo durante todas as fases do protocolo, monitorando a expressão dos marcadores CD34, CD43, CD36, CD71 e CD235a, além da viabilidade celular por meio do 7-AAD. Paralelamente, foram realizadas análises morfológicas por microscopia de campo claro, imunofluorescência e coloração de Romanowsky. Observou-se, a partir do segundo dia de diferenciação, o surgimento de alterações morfológicas compatíveis com o comprometimento hematopoiético, evoluindo para colônias multicamadas compostas por células em diferentes estágios de maturação. As culturas mantiveram elevada viabilidade ao longo de todo o protocolo, apresentando produção contínua de progenitores hematopoiéticos concomitantemente ao amadurecimento celular, apesar da heterogeneidade observada. Todas as colônias atingiram a fase final de diferenciação, demonstrando estabilidade e reprodutibilidade do protocolo. As análises fenotípicas por citometria de fluxo encontram-se em fase final de consolidação e complementarão a caracterização das populações celulares obtidas. A padronização desse protocolo representa uma ferramenta promissora para estudos da eritropoiese, modelagem de doenças hematológicas hereditárias ou adquiridas e futuras aplicações em pesquisa translacional.",
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