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  "abstract": "Introdução: O sistema de grupo sanguíneo Knops é composto por 13 antígenos presentes na proteína CR1 (complement C3b/C4b receptor 1), incluindo os antígenos Kna e Knb, que diferem entre si pelo polimorfismo de nucleotídeo único (SNP) c.4681G>A (rs41274768). O gene CR1, localizado no cromossomo 1, codifica uma glicoproteína de membrana envolvida na ligação e depuração de imunocomplexos pelo sistema fagocítico do fígado e baço. A expressão do CR1 varia amplamente entre os indivíduos e diminui com o envelhecimento das hemácias. Os anticorpos contra antígenos do sistema Knops são detectados na fase de antiglobulina humana (AGH), mas sua fraca reatividade torna difícil a detecção dos antígenos eritrocitários por testes sorológicos. Embora sejam considerados clinicamente pouco significativos para doença hemolítica do feto e do recém-nascido e reações transfusionais hemolíticas, podem ocasionar incompatibilidades sorológicas e atrasar a liberação de hemocomponentes. O objetivo deste estudo foi implementar um ensaio de genotipagem de SNPs por PCR em tempo real para detecção dos alelos KN*01 (Knᵃ) e KN*02 (Knᵇ) no Laboratório de Genotipagem da Fundação Hemocentro de Brasília (FHB). Materiais e métodos: Foi utilizado o equipamento QuantStudio™ 5 Real-Time PCR System, o software QuantStudio™ Design & Analysis e as sondas de hidrólise TaqMan™ SNP Genotyping Assay, marcadas com os fluoróforos VIC® e FAM®, conforme desenho e instruções do fabricante. O DNA genômico foi quantificado no NanoDrop™ One e padronizado para 20 ng/µL (1 µL de DNA por reação). Foram avaliados os parâmetros de desempenho do ensaio, incluindo reprodutibilidade (análise em duplicata em placas independentes processadas por operadores distintos, valor esperado de 100%), call rate (valor esperado de 90%) e quality value (≥95%). Foram analisadas 91 amostras, incluindo três amostras previamente genotipadas para o alelo KN*01 em laboratórios de referência, sendo duas amostras KN*01 e uma KN* (-01), e 88 amostras desconhecidas. O antígeno Knᵃ apresenta alta frequência populacional (≈95,3%) e seu antígeno antitético Knᵇ ocorre em aproximadamente 4,7% da população, o tamanho amostral foi definido de modo a aumentar a probabilidade de representação dos três genótipos possíveis. Resultados: O genótipo de 85 amostras foi KN*01/01, 4 amostras foram KN*01/02 e 2 amostras foram KN*02/02. O ensaio apresentou 100% de reprodutibilidade e 100% de call rate com quality score superior a 98% em todas as amostras. Todas as amostras testadas tiveram o genótipo determinado automaticamente pelo software. O gráfico de discriminação alélica demonstrou agrupamentos claramente definidos e as amostras previamente caracterizadas apresentaram 100% de concordância com os resultados obtidos. Discussão: Dentre as amostras desconhecidas, 95% apresentaram genótipo KN*01/01, 4% KN*01/02 e 1% KN*02/02, essa proporção foi compatível com os registros encontrados na literatura para a população brasileira. Conclusão: A implementação do ensaio de genotipagem de SNPs por RT-PCR para a detecção dos alelos KN*01 e KN*02 foi bem sucedida apresentando excelente desempenho analítico. Essa metodologia amplia a capacidade de atendimento do Laboratório de Genotipagem da FHB, permitindo o suporte à identificação de anticorpos anti-Knᵃ e contribuindo para maior agilidade na investigação imuno-hematológica de pacientes com sorologias complexas e evitando o atraso na liberação de bolsas por anticorpos sem relevância clínica.",
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