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  "abstract": "Introdução: A leucemia linfoide aguda (LLA) é o câncer pediátrico mais frequente, acometendo milhares de crianças anualmente. Apesar das taxas de cura superiores a 80%, muitos desafios ainda persistem, principalmente devido à elevada heterogeneidade molecular da doença. As linhagens celulares constituem importantes modelos experimentais para o estudo da LLA, entretanto, as linhagens atualmente disponíveis não representam toda a diversidade biológica observada nos pacientes. Assim, este projeto teve como objetivo estabelecer e caracterizar novas linhagens celulares derivadas de células primárias de pacientes com LLA atendidos no Hospital Infantil Boldrini. Materiais e métodos: Foram avaliados 107 casos de LLA, cultivados em meio AIM-V sobre matriz de colágeno e estroma de medula óssea durante 80 horas, com monitoramento por microscopia utilizando o sistema EVOS Imaging System (Thermo Fisher Scientific), em conjunto com o projeto PRONON de triagem de fármacos in vitro. Dentre as amostras, cinco apresentaram proliferação sem adição de citocinas e outras doze proliferaram na presença de interleucina-7 (IL-7). Essas 17 amostras foram posteriormente cultivadas em meio RPMI contendo diferentes concentrações de soro fetal bovino (SFB), com ou sem suplementação de IL-7 ou FLT3-L, e em diferentes densidades celulares. O crescimento foi monitorado diariamente por contagem e avaliação de viabilidade celular utilizando Trypan Blue e o equipamento Countess, além de ensaios de proliferação com calceína analisados por citometria de fluxo. A caracterização das amostras inclui ensaios de proliferação com CFSE, análise do ciclo celular, imunofenotipagem, cariotipagem, genotipagem por STR, detecção de transcritos de fusão gênica, análise por MLPA e detecção de rearranjos de Ig/TCR. Resultados: Das 17 amostras avaliadas, seis não apresentaram proliferação em nenhuma das condições testadas. Cinco amostras proliferaram na presença de IL-7, mantendo-se em cultura por aproximadamente 30 dias. Outras duas apresentaram baixas taxas de proliferação, porém elevada viabilidade por mais de três meses, permanecendo em cultura até o momento. Além disso, duas amostras proliferam continuamente na presença de IL-7 há mais de três meses e uma amostra mantém proliferação sustentada por período superior a três meses mesmo na ausência de IL-7. Discussão: Os resultados permitiram classificar as amostras em quatro perfis distintos: 1) amostras incapazes de se manter em cultura por mais de um mês; 2) amostras que apresentam um pico inicial de proliferação seguido de interrupção do crescimento; 3) amostras com baixa proliferação, porém elevada viabilidade por mais de três meses; e 4) amostras com proliferação e viabilidade elevadas por período superior a três meses. Essas diferenças sugerem que características biológicas intrínsecas podem influenciar a adaptação das células ao cultivo in vitro. Os ensaios de caracterização em andamento poderão contribuir para a identificação dos fatores associados a esses diferentes perfis. Conclusão: Os resultados obtidos demonstram que cinco amostras apresentam crescimento sustentado e elevado potencial para o estabelecimento de novas linhagens celulares de LLA, ampliando a disponibilidade de modelos experimentais representativos da heterogeneidade da doença e contribuindo para futuros estudos biológicos e de triagem de novas terapias.",
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      "name": "José Andrés YUNES"
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