{
  "abstract": "Introdução: O desenvolvimento de novas ferramentas de diagnóstico molecular é essencial para promover inovação tecnológica no monitoramento da qualidade e da segurança durante as etapas de produção e liberação de produtos destinados à terapia celular avançada. Este estudo teve como objetivo desenvolver um ensaio de qPCR para detecção rápida de contaminação por micoplasma em produtos de terapia celular avançada. Material e métodos: Foi realizado o alinhamento de sequências de diferentes espécies da classe Mollicutes, seguido de análise in silico para definição da região-alvo e seleção dos primers e sondas para detecção de micoplasma. O gene humano RPP30 foi utilizado como controle interno. Foram avaliados dois métodos de extração de DNA, manual (Microsart® AMP Extraction, Sartorius) e automatizado (Extracta® Kit – DNA e RNA de Patógenos, Loccus), além de três reagentes de amplificação por qPCR (Amplio MasterMix qPCR 2X MDx Standard, (No UDG) e UltraFast, Loccus). O desempenho do ensaio foi investigado com sete combinações de primers e sondas, utilizando padrões comerciais de micoplasmas e de microrganismos não pertencentes à classe Mollicutes. Resultados: Duas combinações de primers e sondas apresentaram amplificação adequada para os alvos micoplasma e RPP30, tanto em reações singleplex quanto duplex. Amostras positivas apresentaram amplificação simultânea dos dois alvos após extração manual e automatizada. Nas amostras negativas foi observada apenas a amplificação de RPP30, confirmando a integridade da amostra, a eficiência da extração e o adequado desempenho da qPCR. Não foram observadas diferenças significativas entre os três reagentes de amplificação avaliados, que apresentaram perfis semelhantes. O método de extração automatizada associado ao ensaio de qPCR detectou 10 CFU/mL de Acholeplasma laidlawii, Mycoplasma pneumoniae e Mycoplasma orale. A especificidade analítica foi avaliada utilizando DNA de Clostridium acetobutylicum, Lactobacillus acidophilus e Streptococcus pneumoniae. Não houve amplificação para L. acidophilus, porém foi observada reação cruzada com C. acetobutylicum e S. pneumoniae. Conclusão: O ensaio permitiu a detecção simultânea de micoplasma e do controle interno RPP30 em uma única reação de qPCR. A sensibilidade analítica atendeu aos requisitos da Farmacopeia Europeia, permitindo a detecção de 10 CFU/mL de A. laidlawii, M. pneumoniae e M. orale. Entretanto, a especificidade foi insuficiente para a detecção exclusiva de micoplasmas. Assim, embora o método apresente elevada sensibilidade, são necessários ajustes no desenho dos oligonucleotídeos para aumentar sua especificidade e reduzir reações cruzadas.",
  "abstract_shown": true,
  "affiliations": [
    "Faculdade de Medicina de Ribeirao Preto (FMRP), Universidade de São Paulo (USP), São Paulo, SP, Brasil",
    "Fundação Hemocentro de Ribeirão Preto, Ribeirão Preto, SP, Brasil"
  ],
  "article_type": null,
  "arxiv": null,
  "author_total": 7,
  "authors": [
    {
      "affs": [
        0
      ],
      "name": "Evandra Strazza RODRIGUES"
    },
    {
      "affs": [
        1
      ],
      "name": "Josiane Serrano BORGES"
    },
    {
      "affs": [
        1
      ],
      "name": "Graciely Gomides GOBO"
    },
    {
      "affs": [
        0
      ],
      "name": "Natália Testa FERNANDES"
    },
    {
      "affs": [
        0
      ],
      "name": "Fabiola TRAINA"
    },
    {
      "affs": [
        0
      ],
      "name": "Rodrigo T CALADO"
    },
    {
      "affs": [
        0
      ],
      "name": "Simone KASHIMA"
    }
  ],
  "bibtex": "https://research.draconitic.com/paper/aw7aesydwyq1h.bib",
  "cited_by": 0,
  "doi": "10.1016/j.htct.2026.106849",
  "fulltext_url": "http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2531137926005961",
  "id": "aw7aesydwyq1h",
  "issns": [
    "2531-1379",
    "2531-1387"
  ],
  "landing_url": "https://doi.org/10.1016/j.htct.2026.106849",
  "language": "en",
  "licence": "CC-BY",
  "licence_label": "CC BY",
  "licence_source": "journal",
  "licence_url": "https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/",
  "metadata_licence": null,
  "native_subjects": [
    [
      "lcc",
      "RC633-647.5"
    ],
    [
      "openalex",
      "2404|Microbial infections and disease research"
    ]
  ],
  "openalex": "W7223125254",
  "pdf_url": null,
  "pmcid": null,
  "pmid": null,
  "published": "2026-10-23",
  "publisher": "Elsevier",
  "ris": "https://research.draconitic.com/paper/aw7aesydwyq1h.ris",
  "sources": [
    {
      "first_seen": "2026-10-30T13:43:20Z",
      "native_id": "85add00c0704450b8fe73e93373e34ae",
      "source": "doaj",
      "url": "https://doi.org/10.1016/j.htct.2026.106849"
    }
  ],
  "subjects": [
    {
      "field": "biology",
      "origin": "openalex:2404|Microbial infections and disease research",
      "subfield": "microbiology"
    }
  ],
  "title": "DESENVOLVIMENTO E AVALIAÇÃO ANALÍTICA DE UM ENSAIO DE qPCR DUPLEX PARA DETECÇÃO RÁPIDA DE MICOPLASMA EM PRODUTOS DE TERAPIA CELULAR AVANÇADA",
  "title_text": "DESENVOLVIMENTO E AVALIAÇÃO ANALÍTICA DE UM ENSAIO DE qPCR DUPLEX PARA DETECÇÃO RÁPIDA DE MICOPLASMA EM PRODUTOS DE TERAPIA CELULAR AVANÇADA",
  "type": "peer-reviewed",
  "updated_at": "2026-10-30T13:43:20Z",
  "url": "https://research.draconitic.com/paper/aw7aesydwyq1h",
  "venue": "Hematology, Transfusion and Cell Therapy",
  "versions": []
}