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  "abstract": "Introdução: A introdução da ciclofosfamida pós-transplante (PTCy) ampliou a utilização de doadores com incompatibilidade HLA. Entretanto, a avaliação imunogenética pré-transplante é fundamental para a identificação de barreiras imunológicas e seleção de doador. A investigação de anticorpos específicos contra o doador (DSA) tem papel relevante, pois se associa a maior risco de falha de enxertia, atraso na recuperação hematopoiética e piores desfechos pós-transplante. A identificação de anticorpos anti-HLA é realizada rotineiramente por meio da tecnologia Single Antigen Bead (SAB/Luminex®), que oferece elevada sensibilidade para detecção e identificação das especificidades dos anticorpos anti-HLA. Entretanto, esse método apresenta limitações, incluindo interferências analíticas, variabilidade dos valores de intensidade média de fluorescência (MFI) entre ensaios e fabricantes, além da ausência de determinadas especificidades HLA nos painéis comerciais disponíveis. Métodos complementares, como a prova cruzada (PC) por citometria de fluxo com linfócitos do doador, possibilitam uma avaliação funcional da interação entre os anticorpos do receptor e as células do doador. Contudo, sua aplicação em transplantes não aparentados é limitada devido às dificuldades logísticas relacionadas à obtenção de amostras viáveis do doador. Objetivos: Descrever a experiência de um laboratório de HLA em situações complexas de investigação de DSA no transplante não aparentado. Material e Métodos: Foram avaliados dois candidatos a TCTH alogênico não aparentado com necessidade de avaliação de risco imunológico complementar. Foram obtidas amostras celulares, avaliadas viabilidade celular, e seguido com realização de PC por citometria de fluxo com linfócitos T e B. Resultados: No primeiro caso, paciente com leucemia linfoide aguda apresentava DSA contra potenciais doadores 8/10. A PC demonstrou forte reatividade contra linfócitos T e B, mantendo positividade até diluição 1:32 com doador inicialmente selecionado. Diante da relevância imunológica, optou-se por doador alternativo sem DSA, ainda que com menor compatibilidade HLA (7/10), considerando estratégias de profilaxia de GVHD com PTCy. No segundo caso, paciente apresentava pesquisa de anticorpos anti-HLA inconclusiva devido a interferentes. Foi identificada incompatibilidade HLA-C com suspeita de DSA contra C*14:02 (MFI=842), abaixo do ponto de corte institucional. A PC demonstrou anticorpos IgG anti-linfócitos B, com reatividade não identificada exclusivamente pelo SAB, sendo estabelecido avaliações seriadas de monitorização pós transplante. Discussão: Apesar dos avanços do SAB, situações específicas podem exigir métodos complementares. A realização de PC com doadores não aparentados é uma estratégia complexa, pois depende da articulação com bancos de doadores, obtenção de amostra celular viável em janela adequada para processamento e integração entre equipe clínica, laboratório e banco de doadores. Conclusão: A avaliação de DSA deve ser interpretada de forma integrada aos achados laboratoriais e ao contexto clínico, especialmente em transplantes com incompatibilidade HLA. A articulação entre equipes pode viabilizar estudos adicionais, como a PC com doadores não aparentados, em situações complexas e pouco descritas, permitindo maior segurança na estratificação do risco imunológico, essencial na seleção de doador. Esses casos reforçam a importância da colaboração multidisciplinar para otimizar os resultados do TCTH.",
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