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Peer-reviewedCC BYHematology, Transfusion and Cell Therapy

ANÁLISE DE AMOSTRAS RHD COM SCOR = <2+ NO LABORATÓRIO DE REFERÊNCIA GRUPO GESTOR DE SERVIÇOS DE HEMOTERAPIA - GRUPO GSH - SÃO PAULO -SP - BRASIL

  1. 1Grupo Gestor de Serviços de Hemoterapia - Grupo GSH, São Paulo, SP, Brasil

Abstract

Introdução: Os genes RHD e RHCE contêm 10 éxons cada e abrangem aproximadamente 75 kb de DNA. O gene RHD é flanqueado por duas sequências altamente homólogas de 9 kb, denominadas Rhesus boxes. A recombinação homóloga desigual entre essas sequências é considerada uma das principais causas da deleção do gene RHD, encontrada em uma parcela significativa da população. Objetivo: Identificar variantes do antígeno RhD utilizando metodologias sorológicas convencionais, o painel ID-Partial RhD Typing Set (Bio-Rad). Material e métodos: Foram estudadas 52 amostras provenientes da rotina de maternidade que apresentaram reatividade entre weak e 2+ com os soros Blend IgG+IgM e Anti-D Rapid (Immucor) no equipamento NEO® (Fresenius Kabi). Após a determinação inicial do RhD, as amostras foram submetidas à confirmação pela técnica em tubo utilizando antissoro monoclonal anti-D fresenius, com leitura em temperatura ambiente, seguida de incubação a 37°C por 15 minutos. Após o período de incubação, realizou-se nova leitura, seguida de três lavagens com solução fisiológica. Posteriormente, adicionaram-se duas gotas de soro antiglobulina humana, procedendo-se à centrifugação e leitura final. O teste confirmatório também foi realizado em gel LISS/Coombs utilizando o reagente ID-Anti-D Confirmatório. Todas as amostras foram submetidas ao Teste Direto da Antiglobulina Humana (TAD), uma vez que resultados positivos podem interferir tanto nos testes confirmatórios quanto na pesquisa de variantes RhD. Após a confirmação de TAD negativo, foi realizada a investigação sorológica utilizando o painel Bio-Rad ID-Partial RhD Typing Set. Resultados: Das 52 amostras analisadas, 26 apresentaram perfil compatível com D Parcial III, 11 com D Parcial V, duas com D Parcial VI e duas com DFR. Oito amostras foram encaminhadas para investigação por biologia molecular, sendo identificados: um caso de DAR 1.2, um caso de D fraco tipo 1, um caso de D fraco tipo 2 e um caso de D fraco tipo 38. Em três amostras, os resultados foram inconclusivos, pois o padrão obtido não correspondeu a nenhuma categoria prevista pelo painel sorológico. Três amostras foram classificadas como RhD positivo. Conclusão: Com o advento dos antissoros monoclonais, a identificação sorológica das variantes RhD tornou-se mais complexa, destacando a necessidade de protocolos específicos para investigação desses casos. A utilização de antissoros com diferentes clones mostrou-se uma estratégia importante para a caracterização sorológica das variantes. Neste estudo, o painel Bio-Rad ID-Partial RhD Typing Set contribuiu para a classificação preliminar das amostras e para a definição da conduta transfusional mais adequada. Entretanto, os casos classificados como D Parcial III, grupo mais frequente nesta casuística, recomenda-se para melhor caracterização e investigação por biologia molecular, permitindo uma caracterização mais precisa e segura dessas variantes.

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AB  - Introdução: Os genes RHD e RHCE contêm 10 éxons cada e abrangem aproximadamente 75 kb de DNA. O gene RHD é flanqueado por duas sequências altamente homólogas de 9 kb, denominadas Rhesus boxes. A recombinação homóloga desigual entre essas sequências é considerada uma das principais causas da deleção do gene RHD, encontrada em uma parcela significativa da população. Objetivo: Identificar variantes do antígeno RhD utilizando metodologias sorológicas convencionais, o painel ID-Partial RhD Typing Set (Bio-Rad). Material e métodos: Foram estudadas 52 amostras provenientes da rotina de maternidade que apresentaram reatividade entre weak e 2+ com os soros Blend IgG+IgM e Anti-D Rapid (Immucor) no equipamento NEO® (Fresenius Kabi). Após a determinação inicial do RhD, as amostras foram submetidas à confirmação pela técnica em tubo utilizando antissoro monoclonal anti-D fresenius, com leitura em temperatura ambiente, seguida de incubação a 37°C por 15 minutos. Após o período de incubação, realizou-se nova leitura, seguida de três lavagens com solução fisiológica. Posteriormente, adicionaram-se duas gotas de soro antiglobulina humana, procedendo-se à centrifugação e leitura final. O teste confirmatório também foi realizado em gel LISS/Coombs utilizando o reagente ID-Anti-D Confirmatório. Todas as amostras foram submetidas ao Teste Direto da Antiglobulina Humana (TAD), uma vez que resultados positivos podem interferir tanto nos testes confirmatórios quanto na pesquisa de variantes RhD. Após a confirmação de TAD negativo, foi realizada a investigação sorológica utilizando o painel Bio-Rad ID-Partial RhD Typing Set. Resultados: Das 52 amostras analisadas, 26 apresentaram perfil compatível com D Parcial III, 11 com D Parcial V, duas com D Parcial VI e duas com DFR. Oito amostras foram encaminhadas para investigação por biologia molecular, sendo identificados: um caso de DAR 1.2, um caso de D fraco tipo 1, um caso de D fraco tipo 2 e um caso de D fraco tipo 38. Em três amostras, os resultados foram inconclusivos, pois o padrão obtido não correspondeu a nenhuma categoria prevista pelo painel sorológico. Três amostras foram classificadas como RhD positivo. Conclusão: Com o advento dos antissoros monoclonais, a identificação sorológica das variantes RhD tornou-se mais complexa, destacando a necessidade de protocolos específicos para investigação desses casos. A utilização de antissoros com diferentes clones mostrou-se uma estratégia importante para a caracterização sorológica das variantes. Neste estudo, o painel Bio-Rad ID-Partial RhD Typing Set contribuiu para a classificação preliminar das amostras e para a definição da conduta transfusional mais adequada. Entretanto, os casos classificados como D Parcial III, grupo mais frequente nesta casuística, recomenda-se para melhor caracterização e investigação por biologia molecular, permitindo uma caracterização mais precisa e segura dessas variantes.
SN  - 2531-1379
SN  - 2531-1387
ER  -