INDUÇÃO DE HEMOGLOBINA FETAL POR UM DEGRADADOR LIGANTE DE CRBN EM ESTUDOS IN VITRO E EM MODELO MURINO DE ANEMIA FALCIFORME
- 1Centro de Hematologia e Hemoterapia, Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP), Campinas, SP, Brasil
- 2Faculdade de Ciências Farmacêuticas, Universidade Estadual de São Paulo (UNESP), Araraquara, SP, Brasil
Abstract
Introdução: A reativação da produção de hemoglobina fetal (HbF) constitui uma estratégia terapêutica consolidada para o tratamento das β-hemoglobinopatias. Atualmente, a hidroxiureia (HU) permanece como o único indutor farmacológico de HbF aprovado para uso clínico. Nesse contexto, degradadores ligantes de cereblon (CRBN) surgem como uma classe promissora de pequenas moléculas capazes de promover a degradação seletiva de proteínas-alvo. Em estudo anterior, demonstramos que o degradador aumentou significativamente a produção de HbF, preservando a diferenciação eritróide em células CD34⁺ humanas. No presente trabalho, avaliamos o desempenho de um degradador ligante de CRBN em comparação e em associação com a HU em células primárias in vitro, além de investigar sua atividade preliminar em camundongos modelo para anemia falciforme (AF). Métodos: Células CD34⁺ isoladas do sangue periférico de doadores saudáveis foram submetidas à diferenciação eritróide in vitro e tratadas com o degradador (10 nM), HU (30 μM) ou a combinação de degradador (10 nM) e HU (30 μM). A porcentagem de células HbF⁺ (CD71⁺CD235⁺), a diferenciação eritróide (%CD71⁺CD235⁺), a viabilidade celular e a contagem de células viáveis foram avaliadas por citometria de fluxo (n=2). Nos estudos in vivo, camundongos Townes SS receberam o degradador (10 mg/kg) ou veículo três vezes por semana durante quatro semanas. A indução de HbF foi avaliada pela quantificação de células-F no sangue periférico e de células HbF⁺ (TER119⁺) na medula óssea. Também foram realizados hemograma completo, porcentagem de reticulócitos, peso corporal e peso relativo de baço (n=2). Resultados: In vitro, o degradador aumentou a porcentagem de células eritróides HbF⁺ de 49,4±11,9% (controle) para 65,4±5,7%, enquanto a HU elevou essa porcentagem para 53,1±11,9%. A associação entre degradador e HU não promoveu aumento adicional da indução de HbF (65,3±3,7%). A diferenciação eritróide permaneceu semelhante entre os grupos (85,9–92,3%) e a viabilidade se manteve acima de 94% em todas as condições. O degradador promoveu pequena redução na contagem de células viáveis em relação ao controle (2,13×10⁴±0,74 vs. 2,76×10⁴±1,26), enquanto a combinação com HU apresentou a menor contagem celular (1,14×10⁴±0,22), seguida da HU isoladamente (1,59×10⁴±0,59). No estudo piloto in vivo, o degradador aumentou a porcentagem de células-F no sangue periférico (4,6±5,0% vs. 8,7±2,7%) e promoveu aumento mais expressivo da porcentagem de células HbF⁺ na medula óssea (2,5±0,4% vs. 7,0±0,7%) e na média de intensidade de fluorescência (22,6±3,6 vs. 36,6±0,6). Além disso, observou-se redução do peso relativo do baço nos animais tratados com o degradador (0,0367±0,0103 vs. 0,0542±0,0061), sem alterações relevantes no ganho de peso, parâmetros hematológicos e na porcentagem de reticulócitos, sugerindo boa tolerabilidade. Conclusão: O degradador aumentou a população HbF⁺ de forma mais robusta que a HU em cultura primária de células eritróides humanas, preservando a diferenciação eritróide e a viabilidade celular, sem benefício adicional quando administrado em associação com a HU. Além disso, demonstrou atividade preliminar in vivo em modelo Townes de AF, especialmente em células eritróides da medula óssea, reforçando seu potencial terapêutico e justificando estudos adicionais para otimização do esquema de tratamento e continuidade de seu desenvolvimento pré-clínico.
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AB - Introdução: A reativação da produção de hemoglobina fetal (HbF) constitui uma estratégia terapêutica consolidada para o tratamento das β-hemoglobinopatias. Atualmente, a hidroxiureia (HU) permanece como o único indutor farmacológico de HbF aprovado para uso clínico. Nesse contexto, degradadores ligantes de cereblon (CRBN) surgem como uma classe promissora de pequenas moléculas capazes de promover a degradação seletiva de proteínas-alvo. Em estudo anterior, demonstramos que o degradador aumentou significativamente a produção de HbF, preservando a diferenciação eritróide em células CD34⁺ humanas. No presente trabalho, avaliamos o desempenho de um degradador ligante de CRBN em comparação e em associação com a HU em células primárias in vitro, além de investigar sua atividade preliminar em camundongos modelo para anemia falciforme (AF). Métodos: Células CD34⁺ isoladas do sangue periférico de doadores saudáveis foram submetidas à diferenciação eritróide in vitro e tratadas com o degradador (10 nM), HU (30 μM) ou a combinação de degradador (10 nM) e HU (30 μM). A porcentagem de células HbF⁺ (CD71⁺CD235⁺), a diferenciação eritróide (%CD71⁺CD235⁺), a viabilidade celular e a contagem de células viáveis foram avaliadas por citometria de fluxo (n=2). Nos estudos in vivo, camundongos Townes SS receberam o degradador (10 mg/kg) ou veículo três vezes por semana durante quatro semanas. A indução de HbF foi avaliada pela quantificação de células-F no sangue periférico e de células HbF⁺ (TER119⁺) na medula óssea. Também foram realizados hemograma completo, porcentagem de reticulócitos, peso corporal e peso relativo de baço (n=2). Resultados: In vitro, o degradador aumentou a porcentagem de células eritróides HbF⁺ de 49,4±11,9% (controle) para 65,4±5,7%, enquanto a HU elevou essa porcentagem para 53,1±11,9%. A associação entre degradador e HU não promoveu aumento adicional da indução de HbF (65,3±3,7%). A diferenciação eritróide permaneceu semelhante entre os grupos (85,9–92,3%) e a viabilidade se manteve acima de 94% em todas as condições. O degradador promoveu pequena redução na contagem de células viáveis em relação ao controle (2,13×10⁴±0,74 vs. 2,76×10⁴±1,26), enquanto a combinação com HU apresentou a menor contagem celular (1,14×10⁴±0,22), seguida da HU isoladamente (1,59×10⁴±0,59). No estudo piloto in vivo, o degradador aumentou a porcentagem de células-F no sangue periférico (4,6±5,0% vs. 8,7±2,7%) e promoveu aumento mais expressivo da porcentagem de células HbF⁺ na medula óssea (2,5±0,4% vs. 7,0±0,7%) e na média de intensidade de fluorescência (22,6±3,6 vs. 36,6±0,6). Além disso, observou-se redução do peso relativo do baço nos animais tratados com o degradador (0,0367±0,0103 vs. 0,0542±0,0061), sem alterações relevantes no ganho de peso, parâmetros hematológicos e na porcentagem de reticulócitos, sugerindo boa tolerabilidade. Conclusão: O degradador aumentou a população HbF⁺ de forma mais robusta que a HU em cultura primária de células eritróides humanas, preservando a diferenciação eritróide e a viabilidade celular, sem benefício adicional quando administrado em associação com a HU. Além disso, demonstrou atividade preliminar in vivo em modelo Townes de AF, especialmente em células eritróides da medula óssea, reforçando seu potencial terapêutico e justificando estudos adicionais para otimização do esquema de tratamento e continuidade de seu desenvolvimento pré-clínico.
SN - 2531-1379
SN - 2531-1387
ER -