PROPOSTA DE UM PAINEL DE CITOMETRIA DE FLUXO DE DEZ CORES PARA AVALIAÇÃO DIAGNÓSTICA E DE DOENÇA RESIDUAL MENSURÁVEL EM LEUCEMIAS AGUDAS COM DIFERENCIAÇÃO MIELOMONOCÍTICA E MONOCÍTICA
- 1Centro de Hematologia e Hemoterapia de Santa Catarina (HEMOSC), Florianópolis, SC, Brasil
Abstract
Introdução: De acordo com os critérios da Organização Mundial da Saúde (5ª edição, 2022) para neoplasias hematolinfoides, a leucemia mielomonocítica aguda é definida pela presença de pelo menos 20% de monócitos e seus precursores, associada a pelo menos 20% de células granulocíticas em maturação e a pelo menos 3% de blastos positivos para mieloperoxidase. Já a leucemia monocítica aguda exige pelo menos 80% de monócitos e/ou seus precursores (monoblastos e/ou promonócitos), com blastos e promonócitos expressando ao menos dois marcadores monocíticos entre CD11c, CD14, CD36 e CD64, além de menos de 20% de células granulocíticas em maturação. Material e métodos: Propomos um painel composto por três tubos de 10 cores (M1, M2 e M7), sendo o tubo M1 para estudo das células precursoras e diferenciação da série granulocítica, o tubo M2 composto por CD34, CD117, IREM-2, HLA-DR, CD45, CD14, CD64, CD86, CD56 e CD33 para avaliar a diferenciação monocítica e o tubo M7 para avaliar fenótipos aberrantes; quando ao diagnóstico os blastos leucëmicos apresentam NG2, o CD25 é substituido por NG2 no tubo M7. O processamento, a marcação e a aquisição das amostras seguiram os procedimentos operacionais padronizados do consórcio EuroFlow para preparo e marcação de amostras, configuração e compensação do equipamento, e composição técnica dos painéis. As amostras foram adquiridas em citômetro de fluxo de dez cores FACSLyric (BD Biosciences), com média de um milhão de eventos por tubo, e analisadas em software Infinicyt. Discussão: Painéis de oito cores permitem identificar o padrão maturativo dos monócitos, mas são limitados para detectar as anormalidades fenotípicas específicas de cada estágio de diferenciação. Nesta proposta, o CD33 apresentou desempenho semelhante ao CD64 para o gate de monócitos, e sua presença em outros tubos do painel amplia a identificação dessa população e de suas aberrações fenotípicas associadas. A combinação de CD14, IREM2 e CD86 permite separar a população monocítica nos seus estágios maturativos permitindo avaliar as expressão aberrante de CD56 nas quatro populações (monoblastos, promonócitos, monócitos imaturos e monócitos maduros). A combinação de CD64 e/ou CD33 para a separação de monócitos também permite identificar células com expressão fraca a negativa de HLA-DR sem contaminação do gate por granulócitos; essa estratégia, no entanto, fica comprometida em síndromes mielodisplásicas, nas quais é comum observar aumento da expressão de CD33 e de CD64 também em granulócitos, representando uma limitação relevante da abordagem proposta. Conclusão: O painel de dez cores proposto amplia, em relação a painéis de oito cores, a capacidade de detecção de aberrações fenotípicas sutis nas leucemias agudas com diferenciação mielomonocítica e monocítica, com potencial aplicação tanto no diagnóstico quanto na avaliação de doença residual mensurável. A validação prospectiva em casuística própria é a próxima etapa necessária para confirmar sua sensibilidade e reprodutibilidade na prática clínica.
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AU - Maria Daniela PERICO
AU - Andressa Martin WAGNER
PY - 2026
DA - 2026/10/23
JO - Hematology, Transfusion and Cell Therapy
DO - 10.1016/j.htct.2026.107432
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AB - Introdução: De acordo com os critérios da Organização Mundial da Saúde (5ª edição, 2022) para neoplasias hematolinfoides, a leucemia mielomonocítica aguda é definida pela presença de pelo menos 20% de monócitos e seus precursores, associada a pelo menos 20% de células granulocíticas em maturação e a pelo menos 3% de blastos positivos para mieloperoxidase. Já a leucemia monocítica aguda exige pelo menos 80% de monócitos e/ou seus precursores (monoblastos e/ou promonócitos), com blastos e promonócitos expressando ao menos dois marcadores monocíticos entre CD11c, CD14, CD36 e CD64, além de menos de 20% de células granulocíticas em maturação. Material e métodos: Propomos um painel composto por três tubos de 10 cores (M1, M2 e M7), sendo o tubo M1 para estudo das células precursoras e diferenciação da série granulocítica, o tubo M2 composto por CD34, CD117, IREM-2, HLA-DR, CD45, CD14, CD64, CD86, CD56 e CD33 para avaliar a diferenciação monocítica e o tubo M7 para avaliar fenótipos aberrantes; quando ao diagnóstico os blastos leucëmicos apresentam NG2, o CD25 é substituido por NG2 no tubo M7. O processamento, a marcação e a aquisição das amostras seguiram os procedimentos operacionais padronizados do consórcio EuroFlow para preparo e marcação de amostras, configuração e compensação do equipamento, e composição técnica dos painéis. As amostras foram adquiridas em citômetro de fluxo de dez cores FACSLyric (BD Biosciences), com média de um milhão de eventos por tubo, e analisadas em software Infinicyt. Discussão: Painéis de oito cores permitem identificar o padrão maturativo dos monócitos, mas são limitados para detectar as anormalidades fenotípicas específicas de cada estágio de diferenciação. Nesta proposta, o CD33 apresentou desempenho semelhante ao CD64 para o gate de monócitos, e sua presença em outros tubos do painel amplia a identificação dessa população e de suas aberrações fenotípicas associadas. A combinação de CD14, IREM2 e CD86 permite separar a população monocítica nos seus estágios maturativos permitindo avaliar as expressão aberrante de CD56 nas quatro populações (monoblastos, promonócitos, monócitos imaturos e monócitos maduros). A combinação de CD64 e/ou CD33 para a separação de monócitos também permite identificar células com expressão fraca a negativa de HLA-DR sem contaminação do gate por granulócitos; essa estratégia, no entanto, fica comprometida em síndromes mielodisplásicas, nas quais é comum observar aumento da expressão de CD33 e de CD64 também em granulócitos, representando uma limitação relevante da abordagem proposta. Conclusão: O painel de dez cores proposto amplia, em relação a painéis de oito cores, a capacidade de detecção de aberrações fenotípicas sutis nas leucemias agudas com diferenciação mielomonocítica e monocítica, com potencial aplicação tanto no diagnóstico quanto na avaliação de doença residual mensurável. A validação prospectiva em casuística própria é a próxima etapa necessária para confirmar sua sensibilidade e reprodutibilidade na prática clínica.
SN - 2531-1379
SN - 2531-1387
ER -