APLICAÇÃO DA TÉCNICA DE BLOQUEIO DAS FRAÇÕES Fc NA INVESTIGAÇÃO DE D FRACO EM AMOSTRAS COM TESTE COOMBS DIRETO POSITIVO
- 1Maternidade Santa Isabel, Bauru, SP, Brasil
- 2Hemonúcleo do Hospital de Base de Bauru, Bauru, SP, Brasil
Abstract
Introdução: A determinação da presença do antígeno RhD nas hemácias é um dos testes mais importantes da imuno-hematologia transfusional, especialmente nas rotinas materno-fetais. Entretanto, a interpretação da pesquisa de D fraco pode ser dificultada em amostras com Teste da Antiglobulina Direta (TAD) positivo, principalmente quando a intensidade da reação observada na fase de antiglobulina humana é semelhante à do TAD. Nesses casos, a presença de imunoglobulinas aderidas à superfície das hemácias pode gerar resultados falso-positivos, comprometendo a correta determinação do fenótipo RhD. A técnica de bloqueio das frações Fc baseia-se na utilização do reagente de antiglobulina humana (Soro de Coombs), cujos anticorpos anti-IgG se ligam às frações Fc livres das imunoglobulinas aderidas às hemácias, impedindo sua detecção durante testes de fenotipagem que dependem da fase de antiglobulina. Objetivos: Demonstrar a validação e a aplicação da técnica de bloqueio das frações Fc na investigação de D fraco em amostras com TAD positivo em uma Agência Transfusional do interior do Estado de São Paulo. Material e métodos: A técnica de bloqueio das frações Fc foi padronizada para amostras com TAD positivo de até 2+ de intensidade e pesquisa de D fraco inconclusiva devido à interferência entre os testes. A validação foi realizada em uma agência transfusional de uma maternidade pública do interior de São Paulo. O protocolo padronizado consiste na utilização de 25 µL de concentrado de hemácias sensibilizadas, previamente lavadas quatro vezes com solução salina a 0,9%, com descarte completo do sobrenadante após a última lavagem. Em seguida, adicionam-se 500 µL de reagente de antiglobulina humana monoespecífico anti-IgG, realizando-se homogeneização da suspensão e incubação por 10 minutos em temperatura ambiente. Após esse período, as hemácias são novamente lavadas duas vezes com solução salina a 0,9%, descartando-se completamente o sobrenadante. Ao término do procedimento, repetem-se a pesquisa de D fraco e o TAD, ambos realizados em plataforma de gel-centrifugação, utilizando o mesmo cartão. Caso o TAD permaneça positivo, o tratamento das hemácias pode ser repetido por até duas vezes. Resultados: Observou-se que, em diversas amostras nas quais a positividade do TAD interferia na pesquisa de D fraco, a aplicação da técnica eliminou ou reduziu significativamente essa interferência, tornando o TAD negativo ou diminuindo sua intensidade. Nas amostras com expressão verdadeira do antígeno RhD, a reatividade permaneceu, permitindo maior confiabilidade na determinação do fenótipo. Desde Março/2025 quando foi padronizada, houve redução de resultados falso-positivos e no número de laudos inconclusivos para pesquisa de D fraco. Discussão/Conclusão: A presença de hemácias sensibilizadas representa um importante desafio na rotina imuno-hematológica materno-fetal, e o bloqueio das frações Fc demonstrou ser uma estratégia simples, de baixo custo e facilmente incorporada à rotina laboratorial. Embora apresente limitações, sendo indicada para amostras com TAD positivo de até 2+, a técnica é uma ferramenta útil na investigação de amostras com pesquisa de D fraco inconclusiva. Sua utilização contribuiu para reduzir resultados falso-positivos e inconclusivos decorrentes da sensibilização eritrocitária, aumentando a segurança da determinação do fenótipo RhD e auxiliando na tomada de decisão na hemoterapia e obstetrícia.
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RIS
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TI - APLICAÇÃO DA TÉCNICA DE BLOQUEIO DAS FRAÇÕES Fc NA INVESTIGAÇÃO DE D FRACO EM AMOSTRAS COM TESTE COOMBS DIRETO POSITIVO
AU - Amanda Gabrielle PAULUCCI
AU - Laís Priscila de Santis FACIN
AU - Júlia Nunes Rodrigues Rodrigues de PAULA
AU - Stephanie Larissa Mendes RODRIGUES
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AU - Priscila Souza Polidoro de LIMA
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PY - 2026
DA - 2026/10/23
JO - Hematology, Transfusion and Cell Therapy
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AB - Introdução: A determinação da presença do antígeno RhD nas hemácias é um dos testes mais importantes da imuno-hematologia transfusional, especialmente nas rotinas materno-fetais. Entretanto, a interpretação da pesquisa de D fraco pode ser dificultada em amostras com Teste da Antiglobulina Direta (TAD) positivo, principalmente quando a intensidade da reação observada na fase de antiglobulina humana é semelhante à do TAD. Nesses casos, a presença de imunoglobulinas aderidas à superfície das hemácias pode gerar resultados falso-positivos, comprometendo a correta determinação do fenótipo RhD. A técnica de bloqueio das frações Fc baseia-se na utilização do reagente de antiglobulina humana (Soro de Coombs), cujos anticorpos anti-IgG se ligam às frações Fc livres das imunoglobulinas aderidas às hemácias, impedindo sua detecção durante testes de fenotipagem que dependem da fase de antiglobulina. Objetivos: Demonstrar a validação e a aplicação da técnica de bloqueio das frações Fc na investigação de D fraco em amostras com TAD positivo em uma Agência Transfusional do interior do Estado de São Paulo. Material e métodos: A técnica de bloqueio das frações Fc foi padronizada para amostras com TAD positivo de até 2+ de intensidade e pesquisa de D fraco inconclusiva devido à interferência entre os testes. A validação foi realizada em uma agência transfusional de uma maternidade pública do interior de São Paulo. O protocolo padronizado consiste na utilização de 25 µL de concentrado de hemácias sensibilizadas, previamente lavadas quatro vezes com solução salina a 0,9%, com descarte completo do sobrenadante após a última lavagem. Em seguida, adicionam-se 500 µL de reagente de antiglobulina humana monoespecífico anti-IgG, realizando-se homogeneização da suspensão e incubação por 10 minutos em temperatura ambiente. Após esse período, as hemácias são novamente lavadas duas vezes com solução salina a 0,9%, descartando-se completamente o sobrenadante. Ao término do procedimento, repetem-se a pesquisa de D fraco e o TAD, ambos realizados em plataforma de gel-centrifugação, utilizando o mesmo cartão. Caso o TAD permaneça positivo, o tratamento das hemácias pode ser repetido por até duas vezes. Resultados: Observou-se que, em diversas amostras nas quais a positividade do TAD interferia na pesquisa de D fraco, a aplicação da técnica eliminou ou reduziu significativamente essa interferência, tornando o TAD negativo ou diminuindo sua intensidade. Nas amostras com expressão verdadeira do antígeno RhD, a reatividade permaneceu, permitindo maior confiabilidade na determinação do fenótipo. Desde Março/2025 quando foi padronizada, houve redução de resultados falso-positivos e no número de laudos inconclusivos para pesquisa de D fraco. Discussão/Conclusão: A presença de hemácias sensibilizadas representa um importante desafio na rotina imuno-hematológica materno-fetal, e o bloqueio das frações Fc demonstrou ser uma estratégia simples, de baixo custo e facilmente incorporada à rotina laboratorial. Embora apresente limitações, sendo indicada para amostras com TAD positivo de até 2+, a técnica é uma ferramenta útil na investigação de amostras com pesquisa de D fraco inconclusiva. Sua utilização contribuiu para reduzir resultados falso-positivos e inconclusivos decorrentes da sensibilização eritrocitária, aumentando a segurança da determinação do fenótipo RhD e auxiliando na tomada de decisão na hemoterapia e obstetrícia.
SN - 2531-1379
SN - 2531-1387
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