FRAÇÕES HÍBRIDAS COMO MARCADORES CROMATOGRÁFICOS IMPORTANTES PARA A IDENTIFICAÇÃO DE HEMOGLOBINAS ALFA VARIANTES NA TRIAGEM NEONATAL

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  author = {Bárbara Braga Vieira MARQUES and Marcela Cantarin RONCADA and Kaiky Corturato PIVA and Lucas Nathan De Souza NUNES and Amanda Cristina Meneguetti BERTI and Luiz Gustavo BERNARDES and Augusto Cesar RODRIGUES and Lucas GAZARINI and Danilo Grunig Humberto DA SILVA and Edis BELINI-JUNIOR},
  journal = {Hematology, Transfusion and Cell Therapy},
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TY  - JOUR
TI  - FRAÇÕES HÍBRIDAS COMO MARCADORES CROMATOGRÁFICOS IMPORTANTES PARA A IDENTIFICAÇÃO DE HEMOGLOBINAS ALFA VARIANTES NA TRIAGEM NEONATAL
AU  - Bárbara Braga Vieira MARQUES
AU  - Marcela Cantarin RONCADA
AU  - Kaiky Corturato PIVA
AU  - Lucas Nathan De Souza NUNES
AU  - Amanda Cristina Meneguetti BERTI
AU  - Luiz Gustavo BERNARDES
AU  - Augusto Cesar RODRIGUES
AU  - Lucas GAZARINI
AU  - Danilo Grunig Humberto DA SILVA
AU  - Edis BELINI-JUNIOR
PY  - 2026
DA  - 2026/10/23
JO  - Hematology, Transfusion and Cell Therapy
DO  - 10.1016/j.htct.2026.106733
UR  - https://doi.org/10.1016/j.htct.2026.106733
AB  - Introdução: A identificação de hemoglobinas (Hb) alfa-variantes (Hb) na triagem neonatal é desafiadora devido à ontogenia incompleta das cadeias globínicas e à quantidade de genes alfa afetados, que influenciam a concentração da Hb anormal. Nesse período, cadeias alfa variantes também se ligam às cadeias gama, formando Hb híbridas (α₂ᵛγ₂) detectáveis pela cromatografia líquida de alta performance (HPLC). Apesar de serem observadas nos ensaios cromatográficos, essas frações permanecem subutilizadas como ferramentas de diagnóstico. Objetivo: Avaliar a contribuição das frações híbridas para o reconhecimento precoce de Hb alfa-variantes na triagem neonatal, destacando suas aplicações e limitações. Materiais e Métodos: Foram selecionadas três pacientes provenientes da triagem neonatal, nas quais a análise por HPLC (Ultra², Trinity Biotech) indicou a presença de hemoglobinas alfa variantes. Os cromatogramas foram avaliados quanto às concentrações de HbF, HbA, Hb alfa-variante e aos respectivos picos híbridos, bem como ao tempo de retenção relativo (RRT) dessas frações. Para confirmação diagnóstica, os genes HBA1 e HBA2 foram submetidos ao sequenciamento de DNA pelo método de Sanger. Os achados cromatográficos foram posteriormente correlacionados aos resultados moleculares para caracterização das Hb alfa-variantes. Resultados: O primeiro paciente (5 meses de idade) foi diagnosticado com Hb G-Philadelphia (HBA1:c.207C>G) em heterozigose. A análise cromatográfica identificou HbF (27,8%), HbA (34,3%), Hb alfa-variante (19,3%) e fração híbrida (RRTA 0.87;14,4%). O segundo paciente (35 dias de idade) foi diagnosticado com Hb Stanleyville-II (HBA1:c.237C>A) em heterozigose; observaram-se HbF (34,5%), HbA (29,4%), Hb alfa-variante (12,5%) e pico híbrido (RRTA 0.95; 13,7%). No terceiro caso (40 dias de idade), identificado como Hb Hasharon (HBA2:c.142G>C), foram observados HbF (39,8%), HbA (38,5%) e Hb alfa-variante (6,4%), em que o pico híbrido coeluiu com a HbA, o que limitou a interpretação. Nos três casos, as Hb alfa-variantes foram confirmadas por sequenciamento de Sanger dos genes HBA1 e HBA2. Discussão: As frações híbridas apresentam um comportamento cromatográfico singular, resultando em RRTs distintos dos observados para a Hb alfa-variante (α₂ᵛβ₂). Essa particularidade permite o uso dessas frações como marcadores cromatográficos para o reconhecimento de Hb alfa-variante. Nos dois primeiros casos, os picos híbridos apresentaram RRT próxima à região da HbF devido à composição (α₂ᵛγ₂), o que sugere um padrão útil para a suspeita diagnóstica. Em contrapartida, no caso da Hb Hasharon, a coeluição do pico híbrido com a HbA dificultou sua individualização e quantificação. Apesar dessa limitação, a identificação das frações híbridas permanece uma ferramenta de grande relevância na triagem neonatal, por possibilitar a detecção de padrões sugestivos e o direcionamento rápido das amostras para investigação molecular. Além disso, a menor concentração da Hb alfa-variante em relação à da Hb beta-variante reforça a suspeita diagnóstica. Conclusão: A análise dos picos híbridos, associado a baixa concentração da variante, é uma ferramenta auxiliar relevante para o reconhecimento de Hb alfa-variantes na triagem neonatal, permitindo o direcionamento precoce para investigação molecular e ampliando a acurácia diagnóstica.
SN  - 2531-1379
SN  - 2531-1387
ER  -