INTERFERÊNCIA IMUNO-HEMATOLÓGICA NA QUANTIFICAÇÃO DE LINFÓCITOS POR CITOMETRIA DE FLUXO EM PACIENTE VIVENDO COM HIV: RELATO DE CASO
- 1Hospital Universitário da Universidade Federal de Sergipe (HU-UFS), Aracaju, SE, Brasil
- 2Fundação de Saúde Parreiras Horta (LACEN-SE), Aracaju, SE, Brasil
- 3Hospital de Urgência de Sergipe, Aracaju, SE, Brasil
Abstract
Introdução: A infecção pelo HIV induz uma profunda desregulação do sistema imunológico, caracterizada por imunodeficiência celular e hiperativação policlonal de linfócitos B, que pode culminar na produção de autoanticorpos contra antígenos eritrocitários, resultando em Anemia Hemolítica Autoimune (AHAI). Amostras que apresentam aglutinação espontânea ao resfriamento são classicamente atribuídas a crioaglutininas do tipo IgM com fixação de complemento. Contudo, fenômenos de pseudo-aglutinação mediados por IgG ou fármacos podem reproduzir esse comportamento. Na imunofenotipagem por citometria de fluxo, agregados celulares podem distorcer a dispersão de luz e as estratégias de gating, comprometendo diretamente a quantificação de linfócitos T CD4+ e CD8+, parâmetros críticos no manejo de Pessoas que vivem com o HIV (PVHIV). Relato do Caso: Paciente masculino, atendido pelo Lacen Sergipe, portador de HIV em terapia antirretroviral, foi hospitalizado com quadro agudo de anemia grave (Hemoglobina inicial: 6,8 g/dL). A investigação imuno-hematológica utilizando os kits da Bio-Rad evidenciou tipagem O positivo e Teste de Antiglobulina Direto (TAD) fortemente positivo (3+) com antissoro monoespecífico anti-IgG. A pesquisa de C3d na membrana eritrocitária foi negativa, mesmo após protocolo de incubação a frio (2 a 8°C por 15 minutos). A Pesquisa de Anticorpos Irregulares (PAI) com o plasma contra painel comercial de hemácias da Bio-Rad foi negativa a 37°C e na fase de Coombs. Na citometria de fluxo para subpopulações de linfócitos, realizada com o citômetro FACSCalibur® (BD Biosciences), a amostra sem preparo prévio apresentou severa distorção gráfica no gate CD45 versus SSC (complexidade lateral) e expressiva perda de eventos na análise de dubletos (FSC-A vs FSC-H), apresentando resultados condizentes com uma falsa linfopenia e subestimando a contagem absoluta de CD3+ e CD4+. As informações laboratoriais foram obtidas junto ao Hospital de Urgência de Sergipe (Hematologia), Lacen Sergipe (Imunofenotipagem) e Hospital Universitário de Sergipe (Imuno-hematologia). Discussão: O perfil laboratorial apresentado por este caso associa aglutinação in vitro a um TAD positivo puramente para IgG e negativo para o C3d, descartando AHAI mista e Doença da Crioaglutinina típica. O fenômeno pode decorrer de alterações agudas na carga zeta dos eritrócitos, induzidas pela infecção viral ou pela terapêutica. O autoanticorpo IgG adsorvido promove a formação de microagregados que levam o software do citômetro a descartar eventos na exclusão de dubletos ou desviar os linfócitos para fora do gate de CD45, gerando risco real de falsa linfopenia. Para garantir a correta aquisição e contagem das células, instituiu-se a lavagem seriada da amostra com solução salina aquecida a 37°C para a remoção do plasma interferente e dos grumos, associada à lise de hemácias, viabilizando uma contagem de linfócitos adequada e condizente com o quadro clínico do paciente após o tratamento da amostra. Conclusão: O caso ressalta que a interface entre a imuno-hematologia e a citometria de fluxo é fundamental. O reconhecimento de perfis sorológicos atípicos e a aplicação de manobras técnicas como a lavagem térmica amostral garantem a segurança analítica e a confiabilidade dos resultados, e com isso, evitam condutas médicas errôneas no monitoramento do HIV.
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TI - INTERFERÊNCIA IMUNO-HEMATOLÓGICA NA QUANTIFICAÇÃO DE LINFÓCITOS POR CITOMETRIA DE FLUXO EM PACIENTE VIVENDO COM HIV: RELATO DE CASO
AU - Alysson Fellipe Costa TELLES
AU - Ludmila Oliveira Carvalho SENA
AU - Antônia Suely Barbosa MAYNARD
PY - 2026
DA - 2026/10/23
JO - Hematology, Transfusion and Cell Therapy
DO - 10.1016/j.htct.2026.106791
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AB - Introdução: A infecção pelo HIV induz uma profunda desregulação do sistema imunológico, caracterizada por imunodeficiência celular e hiperativação policlonal de linfócitos B, que pode culminar na produção de autoanticorpos contra antígenos eritrocitários, resultando em Anemia Hemolítica Autoimune (AHAI). Amostras que apresentam aglutinação espontânea ao resfriamento são classicamente atribuídas a crioaglutininas do tipo IgM com fixação de complemento. Contudo, fenômenos de pseudo-aglutinação mediados por IgG ou fármacos podem reproduzir esse comportamento. Na imunofenotipagem por citometria de fluxo, agregados celulares podem distorcer a dispersão de luz e as estratégias de gating, comprometendo diretamente a quantificação de linfócitos T CD4+ e CD8+, parâmetros críticos no manejo de Pessoas que vivem com o HIV (PVHIV). Relato do Caso: Paciente masculino, atendido pelo Lacen Sergipe, portador de HIV em terapia antirretroviral, foi hospitalizado com quadro agudo de anemia grave (Hemoglobina inicial: 6,8 g/dL). A investigação imuno-hematológica utilizando os kits da Bio-Rad evidenciou tipagem O positivo e Teste de Antiglobulina Direto (TAD) fortemente positivo (3+) com antissoro monoespecífico anti-IgG. A pesquisa de C3d na membrana eritrocitária foi negativa, mesmo após protocolo de incubação a frio (2 a 8°C por 15 minutos). A Pesquisa de Anticorpos Irregulares (PAI) com o plasma contra painel comercial de hemácias da Bio-Rad foi negativa a 37°C e na fase de Coombs. Na citometria de fluxo para subpopulações de linfócitos, realizada com o citômetro FACSCalibur® (BD Biosciences), a amostra sem preparo prévio apresentou severa distorção gráfica no gate CD45 versus SSC (complexidade lateral) e expressiva perda de eventos na análise de dubletos (FSC-A vs FSC-H), apresentando resultados condizentes com uma falsa linfopenia e subestimando a contagem absoluta de CD3+ e CD4+. As informações laboratoriais foram obtidas junto ao Hospital de Urgência de Sergipe (Hematologia), Lacen Sergipe (Imunofenotipagem) e Hospital Universitário de Sergipe (Imuno-hematologia). Discussão: O perfil laboratorial apresentado por este caso associa aglutinação in vitro a um TAD positivo puramente para IgG e negativo para o C3d, descartando AHAI mista e Doença da Crioaglutinina típica. O fenômeno pode decorrer de alterações agudas na carga zeta dos eritrócitos, induzidas pela infecção viral ou pela terapêutica. O autoanticorpo IgG adsorvido promove a formação de microagregados que levam o software do citômetro a descartar eventos na exclusão de dubletos ou desviar os linfócitos para fora do gate de CD45, gerando risco real de falsa linfopenia. Para garantir a correta aquisição e contagem das células, instituiu-se a lavagem seriada da amostra com solução salina aquecida a 37°C para a remoção do plasma interferente e dos grumos, associada à lise de hemácias, viabilizando uma contagem de linfócitos adequada e condizente com o quadro clínico do paciente após o tratamento da amostra. Conclusão: O caso ressalta que a interface entre a imuno-hematologia e a citometria de fluxo é fundamental. O reconhecimento de perfis sorológicos atípicos e a aplicação de manobras técnicas como a lavagem térmica amostral garantem a segurança analítica e a confiabilidade dos resultados, e com isso, evitam condutas médicas errôneas no monitoramento do HIV.
SN - 2531-1379
SN - 2531-1387
ER -