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Peer-reviewedCC BYHematology, Transfusion and Cell Therapy

IDENTIFICAÇÃO DAS UNIDADES FORMADORAS DE COLÔNIAS: NOVA ABORDAGEM PARA AVALIAÇÃO DE DOENÇA RESIDUAL MENSURÁVEL NAS LEUCEMIAS MIELOIDES AGUDAS

  1. 1Instituto Aggeu Magalhães (IAM), Fiocruz, Recife, PE, Brasil
  2. 2Instituto de Medicina Integral Professor Fernando Figueira (IMIP), Recife, PE, Brasil

Abstract

Introdução e objetivos: A leucemia mieloide aguda (LMA) caracteriza-se pela expansão clonal de células mieloides imaturas e apresenta heterogeneidade que influência a resposta ao tratamento, o risco de recaída e o prognóstico, tornando necessário o monitoramento do clone leucêmico através da avaliação da doença residual mensurável (DRM) pela citometria de fluxo. Ademais, a investigação das unidades formadoras de colônias (CFU) reflete o potencial proliferativo e de diferenciação dos progenitores, permitindo o rastreamento de células hematopoiéticas saudáveis e leucêmicas na regeneração medular. A integração entre DRM e CFU pode contribuir na compreensão da biologia da doença, a persistência do clone leucêmico e os mecanismos associados à resposta terapêutica e à recaída. Material e métodos: Esse trabalho foi aprovado pelo comitê de ética (CAAE:83186017.6.0000.5190). As células viáveis ao diagnóstico e nos dois primeiros ciclos do tratamento de 3 pacientes com LMA (subtipos: M0, M5 e M7) foram avaliadas utilizando a metodologia CFU-DURAClone RE AML2 (Beckman Coulter), com o seguinte painel: CD38(FITC), CD371(PE), CD34(ECD), CD117(PC5.5), CD33(PC7), CD99(APC), CD123(A700), CD45RA(A750), HLA-DR(PB), CD45(KO). A expressão dos biomarcadores foi feita no citômetro de fluxo DxFlex (Beckman Coulter, Life Science) e a análise no Kaluza (Beckman Coulter) para o diagnóstico e no Infinicyt (Becton Dickinson) para as DRMs. Com a aplicação desse painel é possível identificar a partir do gate inicial: CD45dim, CD34+, CD117+(-), CD33+, HLA-DR+, e do quadrante CD371 e CD45RA, seis progenitores mieloides expressando CD38+ e CD99+: progenitor mieloide comum (CMP) e granulócito-macrófago (GMP), progenitor multipotente com predisposição linfoide (LMPP) e estágio 1 do precursor de células B (BCP1), progenitor eritro-mieloide (EMP) e progenitor multipotente (MPP), além do clone leucêmico. Os percentuais encontrados foram comparados com o painel padrão (PP) para DRM adaptado do Euroflow já em uso no laboratório. Resultados: O paciente com LMA-M5, na DRM-1, apresentou 93% de células leucêmicas e 0,15% de células progenitoras, sendo classificadas como CMP (PP:92,84% e 0,18%); na DRM-2 apresentou 55,9% de células leucêmicas e ausência de células CD34+ (PP: 52,84%). O paciente com LMA-M0, na DRM-1, apresentou 0,49% do clone leucêmico e 1% de células progenitoras, sendo classificadas como CMP, EMP e MPP (PP: 0,61% e 1%); na DRM-2 apresentou 0,10% do clone leucêmico e 0,91% de células progenitoras sendo caracterizados como CMP, EMP, MPP (PP: 0,11% e 1%). O paciente com LMA-M7 apresentou DRM-1 negativa, com 0,46% de células progenitoras subdivididas em CMP, GMP, BCP1, LMPP, EMP e MPP (PP: 0,48%); na DRM-2 também foi negativa e identificamos 0,32% do progenitor subdivido em CMP, EMP e MPP (PP: 0,40%) e subpopulações como basófilos, células dendríticas, células plasmáticas e hematogônias. Discussão: O tubo para rastreio das CFU permitiu a segmentação eficaz dos precursores mieloides saudáveis, que na análise do painel padrão utilizado no laboratório seria liberado como um precursor mieloide comum. Além disso, as subdivisões dos progenitores mostram como o padrão de regeneração entre as leucemias mieloides é heterogêneo. Adicionalmente, o tubo se mostrou eficaz para o rastreio do clone leucêmico. Considerações finais: Dessa forma, o painel apresentado se torna eficaz para uma aplicação complementar na DRM, auxiliando na compreensão da regeneração dos progenitores mieloides.

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SN  - 2531-1379
SN  - 2531-1387
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