DESENVOLVIMENTO DE UM PROTOCOLO FARMACOGENÔMICO BASEADO NO SEQUENCIAMENTO DO GENE
- 1Universidade de Brasília (UnB), Brasília, DF, Brasil
- 2Hospital da Criança de Brasília José Alencar, Brasília, DF, Brasil
Abstract
Introdução: A leucemia linfoblástica aguda (LLA) é a neoplasia hematológica mais frequente na infância. O tratamento inclui o uso de tiopurinas, como a 6-mercaptopurina, cuja resposta terapêutica e toxicidade podem ser influenciadas por variações genéticas. Nesse contexto, variantes no gene TPMT, responsável por mais de 90% dos alelos inativos relacionados à intolerância às tiopurinas, destacam-se como marcadores farmacogenômicos, tornando a genotipagem uma estratégia para a individualização terapêutica. O sequenciamento pelo método de Sanger permanece como técnica de referência para a detecção e validação de variantes genéticas aplicáveis à prática clínica onco-hematológica. Objetivos: Desenvolver e validar uma estratégia de sequenciamento Sanger para genotipagem de variantes de TPMT em uma coorte pediátrica com leucemia linfoblástica aguda, como etapa de um estudo farmacogenômico voltado à identificação precoce de pacientes com risco aumentado de toxicidade às tiopurinas. Material e Métodos: Foram coletadas amostras de medula óssea de pacientes pediátricos com LLA, das quais foram extraídos DNA genômico e RNA, utilizado na síntese de DNA complementar (cDNA). Foram desenhados primers para amplificação de regiões do gene TPMT por reação em cadeia da polimerase (PCR). Os produtos amplificados foram purificados com kits comerciais e submetidos a sequenciamento Sanger em equipamento ABI 3500. As sequências obtidas foram analisadas no software CLC Main Workbench 6.8, por comparação com a sequência de referência do gene, segundo as diretrizes do CPIC®. Resultados: Das 48 amostras selecionadas, 35 apresentaram RNA disponível para sequenciamento. 6 pacientes apresentaram genótipo *1/*1 (wild-type), classificados como metabolizadores normais. 25 pacientes apresentaram a variante c.474C>T, sem impacto funcional descrito pelo CPIC®, sendo classificados como possíveis metabolizadores normais. 4 pacientes foram classificados como heterozigotos para alelos disfuncionais: três com genótipo *1/*3A (presença das variantes c.460G>A e c.719A>G) e um com genótipo *1/*3C (presença da variante c.719A>G), ambos classificados como metabolizadores intermediários. Todas as variantes apresentaram boa qualidade de leitura. Discussão: A identificação desses pacientes reforça a relevância da triagem farmacogenômica pré-tratamento, permitindo ajuste individualizado da dose de tiopurinas e redução do risco de mielossupressão grave. O sequenciamento Sanger mostrou-se abordagem confiável e reprodutível, servindo de base para expansão futura do painel farmacogenômico, incluindo genes como NUDT15 e MTHFR. Conclusão: A estratégia de sequenciamento Sanger desenvolvida mostrou-se eficaz para a genotipagem de variantes do gene TPMT em pacientes pediátricos com LLA, identificando frequência relevante de variantes associadas a risco de toxicidade por tiopurinas. Os resultados reforçam o potencial da farmacogenômica no apoio à individualização terapêutica e à maior segurança no tratamento da doença hematológica.
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BibTeX
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TI - DESENVOLVIMENTO DE UM PROTOCOLO FARMACOGENÔMICO BASEADO NO SEQUENCIAMENTO DO GENE
AU - Ana Clara Guilherme LIMA
AU - Agenor de Castro Moreira dos SANTOS JÚNIOR
AU - Camilla Delmondes FEITOSA
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PY - 2026
DA - 2026/10/23
JO - Hematology, Transfusion and Cell Therapy
DO - 10.1016/j.htct.2026.108398
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AB - Introdução: A leucemia linfoblástica aguda (LLA) é a neoplasia hematológica mais frequente na infância. O tratamento inclui o uso de tiopurinas, como a 6-mercaptopurina, cuja resposta terapêutica e toxicidade podem ser influenciadas por variações genéticas. Nesse contexto, variantes no gene TPMT, responsável por mais de 90% dos alelos inativos relacionados à intolerância às tiopurinas, destacam-se como marcadores farmacogenômicos, tornando a genotipagem uma estratégia para a individualização terapêutica. O sequenciamento pelo método de Sanger permanece como técnica de referência para a detecção e validação de variantes genéticas aplicáveis à prática clínica onco-hematológica. Objetivos: Desenvolver e validar uma estratégia de sequenciamento Sanger para genotipagem de variantes de TPMT em uma coorte pediátrica com leucemia linfoblástica aguda, como etapa de um estudo farmacogenômico voltado à identificação precoce de pacientes com risco aumentado de toxicidade às tiopurinas. Material e Métodos: Foram coletadas amostras de medula óssea de pacientes pediátricos com LLA, das quais foram extraídos DNA genômico e RNA, utilizado na síntese de DNA complementar (cDNA). Foram desenhados primers para amplificação de regiões do gene TPMT por reação em cadeia da polimerase (PCR). Os produtos amplificados foram purificados com kits comerciais e submetidos a sequenciamento Sanger em equipamento ABI 3500. As sequências obtidas foram analisadas no software CLC Main Workbench 6.8, por comparação com a sequência de referência do gene, segundo as diretrizes do CPIC®. Resultados: Das 48 amostras selecionadas, 35 apresentaram RNA disponível para sequenciamento. 6 pacientes apresentaram genótipo *1/*1 (wild-type), classificados como metabolizadores normais. 25 pacientes apresentaram a variante c.474C>T, sem impacto funcional descrito pelo CPIC®, sendo classificados como possíveis metabolizadores normais. 4 pacientes foram classificados como heterozigotos para alelos disfuncionais: três com genótipo *1/*3A (presença das variantes c.460G>A e c.719A>G) e um com genótipo *1/*3C (presença da variante c.719A>G), ambos classificados como metabolizadores intermediários. Todas as variantes apresentaram boa qualidade de leitura. Discussão: A identificação desses pacientes reforça a relevância da triagem farmacogenômica pré-tratamento, permitindo ajuste individualizado da dose de tiopurinas e redução do risco de mielossupressão grave. O sequenciamento Sanger mostrou-se abordagem confiável e reprodutível, servindo de base para expansão futura do painel farmacogenômico, incluindo genes como NUDT15 e MTHFR. Conclusão: A estratégia de sequenciamento Sanger desenvolvida mostrou-se eficaz para a genotipagem de variantes do gene TPMT em pacientes pediátricos com LLA, identificando frequência relevante de variantes associadas a risco de toxicidade por tiopurinas. Os resultados reforçam o potencial da farmacogenômica no apoio à individualização terapêutica e à maior segurança no tratamento da doença hematológica.
SN - 2531-1379
SN - 2531-1387
ER -