DETECÇÃO POR SEQUENCIAMENTO DE SANGER DE VARIANTES GENÉTICAS NO GENE
- 1Universidade de Brasília (UnB), Brasília, DF, Brasil
- 2Escola Superior de Ciências da Saúde (ESCS), Brasília, DF, Brasil
- 3Hospital da Criança de Brasília José Alencar (HCB), Brasília, DF, Brasil
Abstract
Introdução: A 6-mercaptopurina (6-MP) é um dos principais medicamentos empregados na fase de manutenção do tratamento da leucemia linfoide aguda (LLA) pediátrica. Entretanto, polimorfismos no gene TPMT influenciam seu metabolismo e estão associados ao aumento do risco à toxicidade. Atualmente, a identificação dessas variantes é realizada, predominantemente, por testes genéticos direcionados, como a PCR alelo-específica, que investigam apenas os SNPs mais recorrentes. Como consequência, alterações raras, específicas de determinadas populações ou novas variantes com potencial impacto funcional, podem permanecer não identificadas. Objetivos: Propor uma nova estratégia molecular para investigação de variantes genéticas no gene TPMT em pacientes pediátricos com LLA, visando identificar alterações funcionais que possam contribuir para o aprimoramento da estratificação de risco à toxicidade por tiopurinas. Material e Métodos: Trata-se de um estudo de coorte longitudinal retrospectivo, envolvendo pacientes diagnosticados com LLA-B atendidos no Hospital da Criança de Brasília José Alencar (HCB) entre 2023 e 2025. O RNA total foi extraído, convertido em cDNA e submetido à amplificação por PCR utilizando primers específicos para o gene em questão. Os produtos amplificados foram sequenciados pelo método de Sanger e analisados por softwares de bioinformática, com classificação dos fenótipos conforme as diretrizes do CPIC. O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa (CAAE: 44796221.9.0000.0144). Resultados: Após o desenho e validação dos primers específicos, foram analisadas noventa amostras de pacientes com LLA-B. Destas, nove apresentaram genótipo compatível com metabolizador normal (wild-type), doze com metabolizador intermediário (seis portadores do diplótipo TPMT*1/*3A e seis do diplótipo TPMT*1/*3C) e uma apresentou resultado indeterminado (TPMT*1/*24). Adicionalmente, a variante TPMT:c.474C>T foi identificada em 81 amostras, tanto em heterozigose quanto em homozigose, corroborando sua elevada frequência na população estudada e seu caráter não funcional, uma vez que não está associada à alteração da atividade enzimática da TPMT ou ao metabolismo da 6-mercaptopurina. Discussão e Conclusão: Os resultados obtidos demonstram a aplicabilidade do sequenciamento de cDNA como estratégia complementar aos testes farmacogenéticos convencionais para análise do gene TPMT. Além de permitir a identificação dos principais SNPs associados ao metabolismo das tiopurinas, a metodologia possibilita a investigação de variantes ao longo de toda a região codificante do gene, favorecendo a detecção de alterações raras ou potencialmente funcionais que podem não ser detectadas por testes direcionados. Dessa forma, a abordagem apresenta potencial para ampliar a caracterização farmacogenética de pacientes com LLA e contribuir para uma estratificação mais abrangente do risco de toxicidade à tiopurinas.
Related
- DESEMPENHO DO SEQUENCIAMENTO DE PAINEL MIELOIDE E DE EXOMA NA DETECÇÃO DE VARIANTES SOMÁTICAS EM PACIENTES COM NEOPLASIA MIELODISPLÁSICA
- DESENVOLVIMENTO E VALIDAÇÃO DE ESTRATÉGIA DE SEQUENCIAMENTO DE SANGER PARA FARMACOGENÔMICA DO GENE
- FENÓTIPO RARO JK(A-B-) ASSOCIADO A DUAS NOVAS VARIANTES GENÉTICAS EM GESTANTE: RELATO DE CASO
- DESENVOLVIMENTO DE UM PROTOCOLO FARMACOGENÔMICO BASEADO NO SEQUENCIAMENTO DO GENE
- CARACTERIZAÇÃO DAS VARIANTES DO GENE ACE EM AMBIENTE DE DIAGNÓSTICO MOLECULAR E SUAS IMPLICAÇÕES CLÍNICAS NAS DOENÇAS CARDIOVASCULARES
BibTeX
@article{guedes2026detecção,
title = {{DETECÇÃO POR SEQUENCIAMENTO DE SANGER DE VARIANTES GENÉTICAS NO GENE}},
author = {Cecília Viana de Lima GUEDES and Laryssa Kellye Pereira Soares SOUSA and Ana Clara Guilherme LIMA and Camilla Delmondes FEITOSA and Paschoal Macedo CALORI ROSSETI and Ricardo Laryssa CAMARGO and Agenor de Castro Laryssa MOREIRA DOS SANTOS JUNIOR},
journal = {Hematology, Transfusion and Cell Therapy},
year = {2026},
month = oct,
doi = {10.1016/j.htct.2026.108401},
url = {https://doi.org/10.1016/j.htct.2026.108401},
note = {CC BY},
}
RIS
TY - JOUR
TI - DETECÇÃO POR SEQUENCIAMENTO DE SANGER DE VARIANTES GENÉTICAS NO GENE
AU - Cecília Viana de Lima GUEDES
AU - Laryssa Kellye Pereira Soares SOUSA
AU - Ana Clara Guilherme LIMA
AU - Camilla Delmondes FEITOSA
AU - Paschoal Macedo CALORI ROSSETI
AU - Ricardo Laryssa CAMARGO
AU - Agenor de Castro Laryssa MOREIRA DOS SANTOS JUNIOR
PY - 2026
DA - 2026/10/23
JO - Hematology, Transfusion and Cell Therapy
DO - 10.1016/j.htct.2026.108401
UR - https://doi.org/10.1016/j.htct.2026.108401
AB - Introdução: A 6-mercaptopurina (6-MP) é um dos principais medicamentos empregados na fase de manutenção do tratamento da leucemia linfoide aguda (LLA) pediátrica. Entretanto, polimorfismos no gene TPMT influenciam seu metabolismo e estão associados ao aumento do risco à toxicidade. Atualmente, a identificação dessas variantes é realizada, predominantemente, por testes genéticos direcionados, como a PCR alelo-específica, que investigam apenas os SNPs mais recorrentes. Como consequência, alterações raras, específicas de determinadas populações ou novas variantes com potencial impacto funcional, podem permanecer não identificadas. Objetivos: Propor uma nova estratégia molecular para investigação de variantes genéticas no gene TPMT em pacientes pediátricos com LLA, visando identificar alterações funcionais que possam contribuir para o aprimoramento da estratificação de risco à toxicidade por tiopurinas. Material e Métodos: Trata-se de um estudo de coorte longitudinal retrospectivo, envolvendo pacientes diagnosticados com LLA-B atendidos no Hospital da Criança de Brasília José Alencar (HCB) entre 2023 e 2025. O RNA total foi extraído, convertido em cDNA e submetido à amplificação por PCR utilizando primers específicos para o gene em questão. Os produtos amplificados foram sequenciados pelo método de Sanger e analisados por softwares de bioinformática, com classificação dos fenótipos conforme as diretrizes do CPIC. O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa (CAAE: 44796221.9.0000.0144). Resultados: Após o desenho e validação dos primers específicos, foram analisadas noventa amostras de pacientes com LLA-B. Destas, nove apresentaram genótipo compatível com metabolizador normal (wild-type), doze com metabolizador intermediário (seis portadores do diplótipo TPMT*1/*3A e seis do diplótipo TPMT*1/*3C) e uma apresentou resultado indeterminado (TPMT*1/*24). Adicionalmente, a variante TPMT:c.474C>T foi identificada em 81 amostras, tanto em heterozigose quanto em homozigose, corroborando sua elevada frequência na população estudada e seu caráter não funcional, uma vez que não está associada à alteração da atividade enzimática da TPMT ou ao metabolismo da 6-mercaptopurina. Discussão e Conclusão: Os resultados obtidos demonstram a aplicabilidade do sequenciamento de cDNA como estratégia complementar aos testes farmacogenéticos convencionais para análise do gene TPMT. Além de permitir a identificação dos principais SNPs associados ao metabolismo das tiopurinas, a metodologia possibilita a investigação de variantes ao longo de toda a região codificante do gene, favorecendo a detecção de alterações raras ou potencialmente funcionais que podem não ser detectadas por testes direcionados. Dessa forma, a abordagem apresenta potencial para ampliar a caracterização farmacogenética de pacientes com LLA e contribuir para uma estratificação mais abrangente do risco de toxicidade à tiopurinas.
SN - 2531-1379
SN - 2531-1387
ER -