VALIDAÇÃO E IMPLEMENTAÇÃO DE UM ENSAIO DE GENOTIPAGEM PARA ANTÍGENOS DO SISTEMA DE GRUPO SANGUÍNEO COLTON POR REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE EM TEMPO REAL

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  author = {Flávia Alves MARTINS and Diego Franciel Marques MÜHLBEIER and Luiz Henrique Paz DE LIMA and Guilherme George de Souza RODRIGUES and Franciele Moraes AMARAL and Ana Luísa Alves MAFRA and Samuel Cota TEIXEIRA and Thaís Freitas DA SILVA},
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TY  - JOUR
TI  - VALIDAÇÃO E IMPLEMENTAÇÃO DE UM ENSAIO DE GENOTIPAGEM PARA ANTÍGENOS DO SISTEMA DE GRUPO SANGUÍNEO COLTON POR REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE EM TEMPO REAL
AU  - Flávia Alves MARTINS
AU  - Diego Franciel Marques MÜHLBEIER
AU  - Luiz Henrique Paz DE LIMA
AU  - Guilherme George de Souza RODRIGUES
AU  - Franciele Moraes AMARAL
AU  - Ana Luísa Alves MAFRA
AU  - Samuel Cota TEIXEIRA
AU  - Thaís Freitas DA SILVA
PY  - 2026
DA  - 2026/10/23
JO  - Hematology, Transfusion and Cell Therapy
DO  - 10.1016/j.htct.2026.107018
UR  - https://doi.org/10.1016/j.htct.2026.107018
AB  - Introdução: O sistema de grupo sanguíneo Colton é composto por quatro antígenos expressos na glicoproteína Aquaporina 1, codificada pelo gene AQP1, localizado no cromossomo 7p14.3. Os antígenos Co(a) e Co(b) são antitéticos, sendo o Co(a) de alta frequência e o Co(b) de baixa frequência. Os alelos CO*A e CO*B, responsáveis pela expressão dos antígenos Co(a) e Co(b), diferem entre si pelo polimorfismo de nucleotídeo único c.134C>T (rs28362692). Embora incomuns, os anticorpos dirigidos contra esses antígenos pertencem predominantemente à classe IgG e podem estar associados a reações transfusionais hemolíticas e à doença hemolítica do feto e do recém-nascido. A genotipagem eritrocitária torna-se particularmente útil diante da disponibilidade limitada de antissoros para determinação fenotípica, na investigação de anticorpos anti-Colton e na seleção de hemocomponentes compatíveis. Objetivos: Validar o ensaio de genotipagem por PCR em tempo real utilizando sondas TaqMan® para determinação dos alelos CO*A e CO*B, visando sua implementação no Laboratório de Genotipagem Eritrocitária da Fundação Hemocentro de Brasília. Material e métodos: A genotipagem foi realizada no equipamento QuantStudio™ 5 Real-Time PCR System utilizando ensaios Applied Biosystems™ TaqMan™ SNP Genotyping Assays marcados com os fluoróforos VIC® e FAM®, conforme instruções do fabricante, sendo os resultados analisados no software QuantStudio™ Design & Analysis. O DNA genômico foi quantificado em espectrofotômetro NanoDrop™ One, padronizado para concentração de 20 ng/µL e utilizado na quantidade de 1 µL por reação, em volume final de 10 µL. Para avaliação da acurácia do ensaio, utilizou-se 40 amostras previamente genotipadas por serviços de referência em imuno-hematologia, representando os genótipos CO*A/CO*A, CO*A/CO*B e CO*B/CO*B. A reprodutibilidade foi determinada pela análise, em duplicata, de 92 amostras distribuídas em placas independentes e processadas por operadores distintos. Também foram avaliados call rate e quality score, adotando-se como critérios de aceitação de concordância ≥ 99%, reprodutibilidade de 100%, call rate ≥ 90% e quality score ≥ 95%. Resultados: O ensaio apresentou 100% de concordância entre os genótipos obtidos e aqueles previamente determinados pelos serviços de referência. A análise em duplicata das 92 amostras demonstrou 100% de reprodutibilidade entre diferentes placas e operadores. Todas as amostras foram classificadas automaticamente pelo QuantStudio™ Design & Analysis Software v1.5.1 (call rate de 100%), sem ocorrência de resultados inconclusivos. O quality score foi superior a 98% em todas as análises, excedendo o critério mínimo de aceitação de 95%. Discussão: O atendimento de todos os critérios previamente estabelecidos para validação analítica demonstra que o ensaio apresenta elevada robustez e confiabilidade para determinação dos alelos CO*A e CO*B, oferecendo uma ferramenta molecular complementar quando a caracterização fenotípica é limitada pela disponibilidade restrita de reagentes sorológicos comerciais. Conclusão: O ensaio mostrou-se apto para implementação na rotina do Laboratório de Genotipagem Eritrocitária da Fundação Hemocentro de Brasília, permitindo ampliar o painel de genotipagem eritrocitária disponível para suporte à investigação imuno-hematológica e à seleção de hemocomponentes compatíveis.
SN  - 2531-1379
SN  - 2531-1387
ER  -