IMPLEMENTAÇÃO DE UM ENSAIO DE GENOTIPAGEM ERITROCITÁRIA POR REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE EM TEMPO REAL PARA ANTÍGENOS DO GRUPO SANGUÍNEO KNOPS

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  author = {Thais Freitas DA SILVA and Guilherme George de Souza RODRIGUES and Franciele Moraes AMARAL and Luiz Henrique Paz DE LIMA and Diego Franciel Marques MÜHLBEIER and Ana Luisa Alves MAFRA and Flávia Alves MARTINS},
  journal = {Hematology, Transfusion and Cell Therapy},
  year = {2026},
  month = oct,
  doi = {10.1016/j.htct.2026.106991},
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  note = {CC BY},
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TY  - JOUR
TI  - IMPLEMENTAÇÃO DE UM ENSAIO DE GENOTIPAGEM ERITROCITÁRIA POR REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE EM TEMPO REAL PARA ANTÍGENOS DO GRUPO SANGUÍNEO KNOPS
AU  - Thais Freitas DA SILVA
AU  - Guilherme George de Souza RODRIGUES
AU  - Franciele Moraes AMARAL
AU  - Luiz Henrique Paz DE LIMA
AU  - Diego Franciel Marques MÜHLBEIER
AU  - Ana Luisa Alves MAFRA
AU  - Flávia Alves MARTINS
PY  - 2026
DA  - 2026/10/23
JO  - Hematology, Transfusion and Cell Therapy
DO  - 10.1016/j.htct.2026.106991
UR  - https://doi.org/10.1016/j.htct.2026.106991
AB  - Introdução: O sistema de grupo sanguíneo Knops é composto por 13 antígenos presentes na proteína CR1 (complement C3b/C4b receptor 1), incluindo os antígenos Kna e Knb, que diferem entre si pelo polimorfismo de nucleotídeo único (SNP) c.4681G>A (rs41274768). O gene CR1, localizado no cromossomo 1, codifica uma glicoproteína de membrana envolvida na ligação e depuração de imunocomplexos pelo sistema fagocítico do fígado e baço. A expressão do CR1 varia amplamente entre os indivíduos e diminui com o envelhecimento das hemácias. Os anticorpos contra antígenos do sistema Knops são detectados na fase de antiglobulina humana (AGH), mas sua fraca reatividade torna difícil a detecção dos antígenos eritrocitários por testes sorológicos. Embora sejam considerados clinicamente pouco significativos para doença hemolítica do feto e do recém-nascido e reações transfusionais hemolíticas, podem ocasionar incompatibilidades sorológicas e atrasar a liberação de hemocomponentes. O objetivo deste estudo foi implementar um ensaio de genotipagem de SNPs por PCR em tempo real para detecção dos alelos KN*01 (Knᵃ) e KN*02 (Knᵇ) no Laboratório de Genotipagem da Fundação Hemocentro de Brasília (FHB). Materiais e métodos: Foi utilizado o equipamento QuantStudio™ 5 Real-Time PCR System, o software QuantStudio™ Design & Analysis e as sondas de hidrólise TaqMan™ SNP Genotyping Assay, marcadas com os fluoróforos VIC® e FAM®, conforme desenho e instruções do fabricante. O DNA genômico foi quantificado no NanoDrop™ One e padronizado para 20 ng/µL (1 µL de DNA por reação). Foram avaliados os parâmetros de desempenho do ensaio, incluindo reprodutibilidade (análise em duplicata em placas independentes processadas por operadores distintos, valor esperado de 100%), call rate (valor esperado de 90%) e quality value (≥95%). Foram analisadas 91 amostras, incluindo três amostras previamente genotipadas para o alelo KN*01 em laboratórios de referência, sendo duas amostras KN*01 e uma KN* (-01), e 88 amostras desconhecidas. O antígeno Knᵃ apresenta alta frequência populacional (≈95,3%) e seu antígeno antitético Knᵇ ocorre em aproximadamente 4,7% da população, o tamanho amostral foi definido de modo a aumentar a probabilidade de representação dos três genótipos possíveis. Resultados: O genótipo de 85 amostras foi KN*01/01, 4 amostras foram KN*01/02 e 2 amostras foram KN*02/02. O ensaio apresentou 100% de reprodutibilidade e 100% de call rate com quality score superior a 98% em todas as amostras. Todas as amostras testadas tiveram o genótipo determinado automaticamente pelo software. O gráfico de discriminação alélica demonstrou agrupamentos claramente definidos e as amostras previamente caracterizadas apresentaram 100% de concordância com os resultados obtidos. Discussão: Dentre as amostras desconhecidas, 95% apresentaram genótipo KN*01/01, 4% KN*01/02 e 1% KN*02/02, essa proporção foi compatível com os registros encontrados na literatura para a população brasileira. Conclusão: A implementação do ensaio de genotipagem de SNPs por RT-PCR para a detecção dos alelos KN*01 e KN*02 foi bem sucedida apresentando excelente desempenho analítico. Essa metodologia amplia a capacidade de atendimento do Laboratório de Genotipagem da FHB, permitindo o suporte à identificação de anticorpos anti-Knᵃ e contribuindo para maior agilidade na investigação imuno-hematológica de pacientes com sorologias complexas e evitando o atraso na liberação de bolsas por anticorpos sem relevância clínica.
SN  - 2531-1379
SN  - 2531-1387
ER  -